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脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊
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摘要：背景：脱细胞羊膜支架是一种天然支架，具有良好的生物相容性，已经广泛应用于组织工程的相关领域。Scleraxis能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带细胞分化，进而促进腱-骨愈合。
背景：脱细胞羊膜支架是一种天然支架，具有良好的生物相容性，已经广泛应用于组织工程的相关领域。Scleraxis能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带细胞分化，进而促进腱-骨愈合。
目的：探讨脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊膜间充质干细胞能否促进兔腱-骨愈合。
方法：①体外分离培养人羊膜间充质干细胞，经过传代培养后观察细胞的形态；②体外构建Scleraxis慢病毒然后以最适感染复数转染第3代人羊膜间充质干细胞，q-PCR检测其转染效率；③用酶消化法制备脱细胞羊膜支架，然后体外将转染Scleraxis慢病毒的人羊膜间充质干细胞接种到脱细胞羊膜支架上面，鬼笔环肽染色观察细胞在支架上的生长情况；④将脱细胞羊膜支架复合转染Scleraxis慢病毒的人羊膜间充质干细胞包裹新西兰大白兔跟腱，然后移植到骨隧道内，观察其对腱-骨愈合的影响。
结果与结论：①第3代人羊膜间充质干细胞呈贴壁生长，细胞生长状态良好；②Scleraxis慢病毒转染后96 h表达稳定的绿色荧光，Slclerxis的mRNA表达水平明显提高，说明转染成功；③脱细胞羊膜支架的上皮细胞基本消失，证明脱细胞比较彻底，同时其基底层完整保留，细胞外基质成分仍然存在；④通过鬼笔环肽染色发现细胞在脱细胞羊膜支架上生长良好，增殖未受到影响；⑤体内实验结果提示：人脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊膜间充质干细胞具有促进腱-骨愈合的作用。
贵州省科学技术基金项目(黔科合LH[2017]7015号)，项目负责人：邹刚
BACKGROUND:Acellular amniotic membrane scaffold is a natural scaffold with good biocompatibility,which has been widely used in tissue can promote the differentiation of human amniotic mesenchymal stem cells into human ligament cells and promote tendon-bone healing.
OBJECTIVE:To explore whether acellular amniotic membrane scaffold combined with human amniotic mesenchymal stem cells transfected with Scleraxis can promote rabbit tendon-bone healing.
METHODS:(1) Human amniotic mesenchymal stem cells were isolated and culturedin passaged,the cell morphology was observed.(2) The Scleraxis lentivirus was constructedin vitroand then transfected into passage 3 human amniotic mesenchymal stem cells with optimal multiplicity of transfection efficiency was detected by q-PCR.(3) The acellular amniotic membrane scaffold was prepared by enzymatic the Scleraxis lentivirus-transfected cells were seeded on the acellular amniotic membrane scaffoldin cell growth on the scaffold was observed by phalloidin staining.(4) The New Zealand white rabbit tendon was covered with the acellular amniotic membrane scaffold combined with human amniotic mesenchymal stem cells transfected with Scleraxis lentivirus,followed by implanted into the bone tendon-bone healing was detected.
RESULTS AND CONCLUSION:The passage 3 human amniotic mesenchymal stem cells adhered well.(2) After transfected with Scleraxis lentivirus for 96 hours,stable green fluorescence was mRNA expression level of Sclerxis was significantly increased,indicating a success epithelial cells of the acellular amniotic membrane scaffold disappeared,indicating a relatively complete basal layer remained intact,and the extracellular matrix component still staining results revealed that the cells on the acellular amniotic membrane scaffold were in good adhesion and growth,and the cell proliferation was not ,In vivoexperimental results reveal that human acellular amniotic scaffold combined with human amniotic mesenchymal stem cells transfected with Scleraxis lentivirus can promote the tendon-bone healing.
0 引言 Introduction
韧带/肌腱损伤是临床上较为常见的疾病，多为意外性损伤[1]，损伤后常需要借助手术干预来重建韧带/肌腱。临床上常用的用于重建的移植物主要有股薄肌、半腱肌等[2]。虽然外科手术(重建损伤的韧带/肌腱)已成为治疗韧带/肌腱损伤的首要治疗方案，但由于腱-骨愈合的效果较差，其远期疗效很难满足患者的期望，尤其是运动员。韧带/肌腱与骨之间的特殊结构被称为腱-骨交界区，由一系列过渡的结构组成，包括韧带/肌腱、未钙化的纤维软骨、钙化的纤维软骨和骨组织[3]。腱-骨交界区可以有效缓解从韧带/肌腱传递到骨的力[4]，但是交界区域的纤维软骨结构相对无血管性，因此损伤后愈合缓慢且难以完全恢复其原始结构[5]。由于腱-骨交界区具有特殊的结构和重要的功能，因此如何在损伤后加速其愈合已成为目前研究的热点。近年来，相关基础研究已经采取了多种方法来加速腱-骨愈合，主要包括基于细胞的疗法、使用生长因子以及使用各种仿生支架材料[6]，但是这些方法都很难形成可以在结构和功能上完全替代原来腱-骨交界面的特殊结构。尽管一些研究者观察到间接连接的形成[7-8]，但是在不同的腱-骨模型中形成的间接连接在组织结构和机械强度上远不如天然的腱-骨交界区。
文章来源：《中国组织工程研究》 网址: http://www.zgzzgcyj.cn/qikandaodu/2020/1110/879.html